Kit zur Nukleinsäureextraktion (Magnetic Bead-Methode)

Bestimmungsgemäße Verwendung

Dieses Produkt dient der Extraktion, Anreicherung und Reinigung von Nukleinsäuren. Die Extraktion dient der klinischen In-vitro-Diagnostik.

Prinzip

Hochwertige Nukleinsäuren können mithilfe eines einzigartigen Puffersystems aus Lyselösung, Waschlösung A und Waschlösung B mit Trennfunktion aus komplexen Proben getrennt und gereinigt werden. Die einzigartigen eingebetteten Magnetkügelchen haben unter bestimmten Bedingungen eine starke Affinität zu Nukleinsäuren. Bei veränderten Bedingungen geben die Magnetkügelchen die absorbierten Nukleinsäuren frei. Dieses Kit kann Nukleinsäuren mit hoher Reinheit und stabiler Qualität extrahieren und eignet sich daher für sensible nachgelagerte Anwendungen wie Echtzeit-qPCR.

Lagerung und Stabilität

Lagern Sie das Kit 6 Monate lang bei 15–30 °C und vor Licht geschützt.

Bei Raumtemperatur transportieren.

Herstellungsdatum und Verfallsdatum: Einzelheiten finden Sie auf dem Etikett.

Anwendbare Geräte

Manueller Betrieb: Zentrifuge, Konstanttemperaturmischer, 2-ml-Magnetgestell (Magnetabscheider).

Probenanforderungen

1. Probentyp

Speichel.

2. Probenentnahme

Spülen Sie Ihren Mund 30 Minuten vor der Entnahme mit klarem Wasser aus (eine Entnahme unmittelbar nach der Spülung ist nicht gestattet). Drücken Sie Ihre Zungenspitze gegen die Ober- oder Unterkieferzahnwurzel, um den Speichel anzureichern, und spucken Sie vorsichtig Speichel in den ovalen Trichter, bis der flüssige Speichel (ohne Blasen) die Füllhöhe von 2 ml erreicht. Schrauben Sie den Trichter vorsichtig vom Probenentnahmeröhrchen ab (achten Sie darauf, dass das Probenentnahmeröhrchen während des Vorgangs aufrecht steht). Verschließen Sie das Probenentnahmeröhrchen mit der roten Kappe. Überprüfen Sie, ob das Probenentnahmeröhrchen in gutem Zustand ist und ob Proben übergelaufen sind, z. B. durch Risse im Röhrchen oder einen offenen Deckel. Entsorgen Sie den gebrauchten Trichter.

Testverfahren

1. Probenvorbehandlung

Zentrifugieren Sie die Speichelprobe 10 Minuten lang bei 4 °C und 3000 U/min und sammeln Sie den Überstand in einem neuen Zentrifugenröhrchen (achten Sie darauf, den Niederschlag nicht zu übertragen). Das Zentrifugenröhrchen wurde 2 Minuten lang bei 4 °C und 13.000 U/min zentrifugiert und der gesammelte Überstand konnte aus der Nukleinsäureprobe extrahiert werden.

2. Manuelle Extraktion

2.1 Probenrissbildung

Geben Sie 300 μl Probe (die Probe muss auf Raumtemperatur gebracht werden), 20 μl Proteinase-K-Lösung und 500 μl Lysepuffer in ein 1,5-ml-Zentrifugenröhrchen, vortexen Sie es 10 Sekunden lang und stellen Sie es dann für 4 Minuten in einen Konstanttemperaturmischer bei 80 °C und 1200 U/min.

2.2 Nukleinsäureadsorption

Geben Sie 10 μl Magnetic Beads Buffer in das Zentrifugenröhrchen, vortexen Sie es 10 Sekunden lang und stellen Sie es dann für 4 Minuten auf einen Konstanttemperaturmischer bei Raumtemperatur und 1200 U/min.

Stellen Sie das Zentrifugenröhrchen auf das Magnetgestell und saugen Sie, nachdem die Magnetkügelchen vollständig absorbiert sind, vorsichtig die gesamte Flüssigkeit auf.

2.3 Probespülung 1

Geben Sie 500 μl Waschpuffer A in das Zentrifugenröhrchen, vortexen Sie es 10 Sekunden lang und stellen Sie es dann für 2 Minuten auf einen Konstanttemperaturmischer bei Raumtemperatur und 1200 U/min.

Stellen Sie das Zentrifugenröhrchen auf das Magnetgestell und saugen Sie, nachdem die Magnetkügelchen vollständig absorbiert sind, vorsichtig die gesamte Flüssigkeit auf.

2.4 Probenspülung 2

Geben Sie 500 μl Waschpuffer B in das Zentrifugenröhrchen, vortexen Sie es 10 Sekunden lang und stellen Sie es dann für 2 Minuten auf einen Konstanttemperaturmischer bei Raumtemperatur und 1200 U/min.

Stellen Sie das Zentrifugenröhrchen auf das Magnetgestell und saugen Sie, nachdem die Magnetkügelchen vollständig absorbiert sind, vorsichtig die gesamte Flüssigkeit auf.

2.5 Nukleinsäureelution

Trocknen Sie das Zentrifugenröhrchen 2–5 Minuten lang, um sicherzustellen, dass keine Wasserrückstände vorhanden sind.

Geben Sie 50 μl Elutionspuffer in das Zentrifugenröhrchen, vortexen Sie es 10 Sekunden lang und stellen Sie es dann für 5 Minuten in einen Konstanttemperaturmischer bei 56 °C und 1200 U/min.

Stellen Sie das Zentrifugenröhrchen auf das Magnetgestell und sammeln Sie nach der Adsorption der Magnetkügelchen die Nukleinsäurelösung in einem neuen Zentrifugenröhrchen und lagern Sie es bei -20 °C oder für längere Zeit bei -80 °C.